二抗在免疫学实验中起着举足轻重的作用，二抗的选择也决定了整个实验的成败。
实验中在选择二抗时必须注意以下几点：（1） 一抗种属来源，主要根据一抗种属来源来决定确定二抗的类型，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（如羊抗小鼠、兔抗小鼠等均可）。
（2）标记物的选择。
一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE）和生物素。
选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。
对于western blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。
如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用biotin/avidin检测系统。

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